一、概述

生物等效性（Bioequivalence, BE）研究是比較受試制劑（T）與參比制劑（R）的吸收速度和吸收程度差異是否在可接受范圍內(nèi)的研究，可用于化學(xué)藥物仿制藥的上市申請，也可用于已上市藥物的變更（如新增規(guī)格、新增劑型、新的給藥途徑）申請。

目前生物等效性研究通常推薦使用平均生物等效性（Average Bioequivalence, ABE）方法。平均生物等效性方法只比較藥代動力學(xué)參數(shù)的平均水平，未考慮個體內(nèi)變異及個體與制劑的交互作用引起的變異。在某些情況下，可能需要考慮其他分析方法。例如氣霧劑的體外BE研究可采用群體生物等效性（Population Bioequivalence，PBE）方法，以評價制劑間藥代動力學(xué)參數(shù)的平均水平及個體內(nèi)變異是否等效。

本指導(dǎo)原則旨在為以藥代動力學(xué)參數(shù)為終點評價指標的生物等效性研究的研究設(shè)計、數(shù)據(jù)分析和結(jié)果報告提供技術(shù)指導(dǎo)，是對生物等效性研究數(shù)據(jù)資料進行統(tǒng)計分析的一般原則。在開展生物等效性研究時，除參考本指導(dǎo)原則的內(nèi)容外，尚應(yīng)綜合參考《以藥動學(xué)參數(shù)為終點評價指標的化學(xué)藥物仿制藥人體生物等效性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》和《藥物臨床試驗的生物統(tǒng)計學(xué)指導(dǎo)原則》等相關(guān)指導(dǎo)原則。

二、研究設(shè)計

（一）總體設(shè)計考慮

生物等效性研究可采用交叉設(shè)計或者平行組設(shè)計。

1.交叉設(shè)計

生物等效性研究一般建議采用交叉設(shè)計的方法。交叉設(shè)計的優(yōu)勢包括：可以有效減少個體間變異給試驗評價帶來的偏倚；在樣本量相等的情況下，使用交叉設(shè)計比平行組設(shè)計具有更高的檢驗效能。

兩制劑、兩周期、兩序列交叉設(shè)計是一種常見的交叉設(shè)計，見表1。

表1  兩制劑、兩周期、兩序列交叉設(shè)計

如果需要準確估計某一制劑的個體內(nèi)變異，可采用重復(fù)交叉設(shè)計。重復(fù)交叉設(shè)計包括部分重復(fù)（如兩制劑、三周期、三序列）或者完全重復(fù)（如兩制劑、四周期、兩序列），見表2和表3。

表2  兩制劑、三周期、三序列重復(fù)交叉設(shè)計

表3  兩制劑、四周期、兩序列重復(fù)交叉設(shè)計

2.平行組設(shè)計

在某些特定情況下（例如半衰期較長的藥物），也可以使用平行組設(shè)計。平行組設(shè)計因個體間變異給試驗帶來的影響較交叉設(shè)計大，應(yīng)有更嚴格的受試者入選條件，如年齡、性別、體重、疾病史等，且需使用合理的隨機化方案確保組間的基線水平均衡以得到更好的組間可比性。

3.其他設(shè)計

如果采用適應(yīng)性設(shè)計等其他設(shè)計方法，可參考《藥物臨床試驗的生物統(tǒng)計學(xué)指導(dǎo)原則》，且應(yīng)事先與監(jiān)管機構(gòu)溝通。

（二）樣本量

試驗前需充分估計所需的樣本量，以保證足夠的檢驗效能，并在試驗方案中詳細說明樣本量估計方法和結(jié)果。使用ABE方法進行生物等效性分析時，應(yīng)基于明確的公式合理估計樣本量。不同的設(shè)計，對應(yīng)的樣本量估計公式不同。

交叉設(shè)計的樣本量需考慮的因素包括：（1）檢驗水準α，通常為雙側(cè)0.1（雙單側(cè)0.05）；（2）檢驗效能1-β，通常至少為80%；（3）個體內(nèi)變異系數(shù)（Within-subject coefficient of variation，CV_w%），可基于文獻報道或預(yù)試驗結(jié)果進行估計；（4）幾何均值比（Geometric mean ratio, GMR）；（5）等效性界值。平行組設(shè)計的樣本量估計可參考一般連續(xù)型變量的樣本量計算公式。

如果使用的分析方法沒有明確的樣本量計算公式，也可以采用計算機模擬的方法估計樣本量。

（三）受試者脫落

為了避免研究過程中因受試者的脫落導(dǎo)致樣本量不足，申請人在進行樣本量估計時應(yīng)考慮適當增加樣本量。

一般情況下，試驗開始后不應(yīng)再追加受試者。已分配隨機號的受試者通常不可以被替代。

（四）殘留效應(yīng)

使用交叉設(shè)計進行BE研究通過每個受試者自身對照來增加比較的精度，其基本假設(shè)是所比較的制劑在下一周期試驗時均不存在殘留效應(yīng)，或殘留效應(yīng)相近。如果交叉設(shè)計中存在不相等的殘留效應(yīng)，那么對于GMR的估計可能有偏。

研究設(shè)計時應(yīng)避免發(fā)生殘留效應(yīng)。如果發(fā)現(xiàn)存在殘留效應(yīng)，申請人應(yīng)當分析產(chǎn)生的可能原因，提供相應(yīng)的判斷依據(jù)，評估其對最終結(jié)論的影響。

三、數(shù)據(jù)處理和分析

（一）數(shù)據(jù)集

數(shù)據(jù)集事先需要在方案中明確定義，包括具體的受試者剔除標準。一般情況下，BE研究的數(shù)據(jù)集應(yīng)至少包括藥代動力學(xué)參數(shù)集（Pharmacokinetics Parameter Set，PKPS）、生物等效性集（Bioequivalence Set，BES）。用于不同藥代動力學(xué)參數(shù)分析的受試者數(shù)量可能不同。

藥代動力學(xué)參數(shù)集（PKPS）：包括接受過至少一次研究藥物的受試者中獲得的藥代動力學(xué)參數(shù)數(shù)據(jù)集。本數(shù)據(jù)集的作用在于描述性統(tǒng)計受試者的藥代動力學(xué)參數(shù)數(shù)據(jù)。

生物等效性集（BES）：通常包括至少一個周期且具有至少一個可評價藥代動力學(xué)參數(shù)的統(tǒng)計分析集。本數(shù)據(jù)集是推斷受試制劑和參比制劑是否生物等效的主要數(shù)據(jù)集。

（二）數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換

建議對藥代動力學(xué)參數(shù)（如AUC和C_max）使用自然對數(shù)進行數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換。選擇的對數(shù)轉(zhuǎn)換方式應(yīng)在試驗過程中保持一致，且需在方案中指明。在生物等效性研究中，由于樣本量較少，難以確定數(shù)據(jù)的分布。因此，不建議以對數(shù)轉(zhuǎn)換后數(shù)據(jù)不服從正態(tài)分布，或原始數(shù)據(jù)服從正態(tài)分布為由，而使用原始數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。

（三）統(tǒng)計假設(shè)與推斷

平均生物等效要求受試制劑和參比制劑的差異在一定可接受范圍內(nèi)，通過以下假設(shè)檢驗來進行統(tǒng)計推斷。

原假設(shè)H₀：或

備擇假設(shè)H₁：

其中μ_T為受試制劑對數(shù)變換后藥代參數(shù)總體均數(shù)，μ_R為參比制劑對數(shù)變換后藥代參數(shù)總體均數(shù)，θ為生物等效性界值。在設(shè)定的檢驗水準下，若拒絕原假設(shè)H₀，則表明生物等效。通常設(shè)定θ=ln（1.25），-θ=ln（0.8），即生物等效性要求受試制劑和參比制劑的GMR落在80.00%—125.00%范圍內(nèi)。

生物等效性標準應(yīng)同時適用于各主要藥代動力學(xué)參數(shù)，包括C_max、AUC_0-t和AUC_0-∞。

通常情況下，如果研究藥物包含多個組分，則每個組分均應(yīng)符合生物等效性標準。

當T_max與藥物的臨床療效密切相關(guān)時，通常采用配對非參數(shù)方法對T_max進行差異性檢驗。

（四）數(shù)據(jù)分析

1.概述

對于上文提到的生物等效性標準，通常是構(gòu)建的雙側(cè)90%置信區(qū)間，若此置信區(qū)間落在區(qū)間內(nèi)，則可推斷受試制劑和參比制劑滿足生物等效。此方法等價于在0.05的檢驗水準下進行雙單側(cè)假設(shè)檢驗。應(yīng)根據(jù)不同的試驗設(shè)計選擇恰當的置信區(qū)間計算方法。計算出的雙側(cè)90%置信區(qū)間后，可通過逆對數(shù)變換（指數(shù)變換）得到受試制劑和參比制劑原始數(shù)據(jù)的GMR的雙側(cè)90%置信區(qū)間。

2.交叉設(shè)計

對于交叉設(shè)計，建議使用線性混合效應(yīng)模型進行分析計算。

3.平行組設(shè)計

建議采用基于正態(tài)分布均數(shù)差值的置信區(qū)間構(gòu)建方法。

（五）離群數(shù)據(jù)處理

通常不建議剔除離群值。必要時需要針對離群值進行敏感性分析，即評價剔除和不剔除離群值對生物等效性結(jié)果的影響。如果結(jié)論不一致，需解釋說明并分析原因。

（六）其他問題

如果一個交叉設(shè)計是在兩個及以上的中心進行，統(tǒng)計模型中應(yīng)該考慮中心效應(yīng)。所用模型應(yīng)該能估計不同中心的效應(yīng)，反映不同中心的實際情況，并說明來自不同中心的試驗數(shù)據(jù)是否可以合并進行分析。

如果存在多種受試制劑和/或多種參比制劑，通常會有多個生物等效的假設(shè)檢驗。若多個假設(shè)檢驗需同時滿足，則無需進行I類錯誤的調(diào)整；若不要求同時滿足，則需對I類錯誤進行調(diào)整，調(diào)整的方法有Bonferroni法、Hochberg法等。

四、結(jié)果報告

結(jié)果報告中應(yīng)對以下內(nèi)容進行詳細說明。

（一）隨機化

應(yīng)具體說明試驗用的隨機化系統(tǒng)和隨機化方案，包括隨機化控制的因素、區(qū)組、種子數(shù)等，并附有隨機化數(shù)字表。

隨機化的結(jié)果應(yīng)用表格描述，其中包含受試者編號、每一周期的用藥情況，以及隨機化控制的因素等。隨機化結(jié)果可在附錄中展現(xiàn)。

（二）統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)說明所采用的統(tǒng)計學(xué)方法，包括藥代動力學(xué)參數(shù)的計算方法、分析模型和等效性檢驗方法、對數(shù)轉(zhuǎn)換等內(nèi)容。還需說明使用軟件的名稱與版本號。

（三）統(tǒng)計分析結(jié)果

應(yīng)提供每個受試者給藥后的檢測成分濃度檢測結(jié)果。在附錄中應(yīng)同時給出算術(shù)坐標以及對數(shù)坐標下每個受試者給藥后的藥時曲線、不同藥物制劑的平均藥時曲線。

應(yīng)提供每個受試者的藥代動力學(xué)參數(shù)結(jié)果，包括受試制劑和參比制劑的算術(shù)均值、幾何均值、標準差和變異系數(shù)。

應(yīng)提供包含序列內(nèi)嵌套受試者、序列、周期和制劑因素的混合效應(yīng)模型結(jié)果。若存在其他還需考慮的因素，也應(yīng)包含在模型中。

應(yīng)提供藥代動力學(xué)參數(shù)幾何均值比及其置信區(qū)間估計結(jié)果。

五、數(shù)據(jù)管理

以注冊上市為目的的生物等效性研究的數(shù)據(jù)管理可參考臨床試驗數(shù)據(jù)管理相關(guān)技術(shù)要求。

生物等效性研究中生物樣本分析等數(shù)據(jù)為外部數(shù)據(jù)，在樣本分析及相關(guān)數(shù)據(jù)傳輸過程中應(yīng)保持盲態(tài)，并按照提前制定的傳輸協(xié)議進行數(shù)據(jù)傳輸。試驗涉及到的生物樣本分析、數(shù)據(jù)傳輸和統(tǒng)計分析相關(guān)的計算機化系統(tǒng)應(yīng)經(jīng)過驗證并保持驗證狀態(tài)。

六、參考文獻

1.CFDA：以藥動學(xué)參數(shù)為終點評價指標的化學(xué)藥物仿制藥人體生物等效性研究技術(shù)指導(dǎo)原則. 2016年3月.

2.CFDA：藥物臨床試驗的生物統(tǒng)計學(xué)指導(dǎo)原則. 2016年6月.

3.FDA：Guidance for Industry: Statistical Approaches to Establishing Bioequivalence. Jan 2001.

4.EMA：Guideline on the Investigation of Bioequivalence. Aug 2010.

5.EMA：Questions & Answers: Positions on Specific Questions Addressed to the Pharmacokinetics Working Party. Nov 2015.

七、術(shù)語表